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有关活性蛋白的提取试验解析

  • 发布日期:2021-06-15      浏览次数:38
    •    活性蛋白试剂适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取蛋白。提取过程可在1小时内完成。试剂含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。活性蛋白独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于蛋白质电泳、免疫共沉淀、酶活测定等下游蛋白研究。
        活性蛋白的提取试验技术解读:
        一、细胞蛋白提取
        1.提取液制备:每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
        2.取5~10·10⁶个细胞,在4℃,100pm条件下离心5-10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
        3.用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
        4.每5·10⁶个细胞中加入500ul冷的蛋白提取液,混匀后,在4℃条件下振荡15-20分钟。
        5.在4℃,14000rpm条件下离心15分钟。
        6.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到蛋白样品。
        7.将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
        二、组织蛋白提取
        1.提取液制备:每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
        2.取100mg组织样本剪碎,加入蛋白提取液,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
        3.将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中,在4℃,10000rpm条件下离心5分钟。
        4.将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到活性蛋白样品。
        5.将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
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