有关活性蛋白的提取试验解析

 　　活性蛋白试剂适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取蛋白。提取过程可在1小时内完成。试剂含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。活性蛋白*配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于蛋白质电泳、免疫共沉淀、酶活测定等下游蛋白研究。
　　活性蛋白的提取试验技术解读：
　　一、细胞蛋白提取
　　1.提取液制备：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
　　2.取5~10·10⁶个细胞，在4℃，100pm条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
　　3.用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
　　4.每5·10⁶个细胞中加入500ul冷的蛋白提取液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。
　　5.在4℃，14000rpm条件下离心15分钟。
　　6.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到蛋白样品。
　　7.将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
　　二、组织蛋白提取
　　1.提取液制备：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
　　2.取100mg组织样本剪碎，加入蛋白提取液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
　　3.将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃，10000rpm条件下离心5分钟。
　　4.将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到活性蛋白样品。
　　5.将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。