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慢病毒包装的作用和关键点说明

  • 发布日期:2021-12-28      浏览次数:166
    •   慢病毒是逆转录病毒的一种,它能够将靶基因导入到一些较难转染的细胞,如原代细胞等,并且将靶基因随机整合到宿主的基因组中,从而大大增加了转染效率,并且能够在细胞系中稳定表达若干代,可以进行稳转细胞株的筛选。因为是随机整合,也有不确定因素,有些公司还能提供定点整合技术,将靶基因定点整合到基因组特定的部位,从而保证其高效表达并且对细胞不产生随机整合可能产生的伤害。

        慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装shRNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装,包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表达效应分子。

        慢病毒包装的几个关键点:
        其关键点是细胞因素、载体系统(尽量使用成熟的商业化载体系统)、构建重组的质粒正确与否、质粒抽提纯化情况、包装转染控制(24、48小时的细胞及荧光状态判断)、目的基因对病毒包装影响(基因大小、序列情况、蛋白功能毒性等都会影响到是否能包装成功)。
        纯化后的慢病毒保存方法:慢病毒纯化后的病毒用无血清的DMEM保存就可以了,一般放在-80度进行长久保存。如果收集的上清不想立即纯化可先放在-80度,等下次收集的一起纯化。目的蛋白在包装细胞中或者滴度测定细胞中会表达的,滴度测定就是根据目的蛋白表达情况来进行操作的。
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