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影响稳转细胞株建立的主要因素是什么?

  • 发布日期:2022-03-01      浏览次数:184
    •   稳转细胞株是指持续稳定地在细胞中表达特定基因,或抑制特定基因的表达。 稳定细胞株的目的将基因质粒DNA整合到细胞染色体上,细胞长期稳定表达该基因。 在基因功能的研究中,基因是否有效转染靶细胞是功能研究的前提条件之一。 另一方面,稳定表达细胞株弥补了外源基因在一些瞬时感染(或转染)的功能实验中表达时间短的缺点,便于长期观察基因对细胞功能的影响和蛋白之间的相互作用。
        稳转细胞株建立的时间:
        需要长期在目的细胞中研究基因功能,建立稳定的周转细胞系可以降低频繁转染和病毒包装的成本,便于实验研究
        部分蛋白质半衰期极长,瞬时RNA只能干扰表达,不能清除已经表达的目的蛋白。 建立稳定细胞系可以达到更好的基因干预效果;
        瞬转会引入*拷贝数的表达,人为因素导致实验结果不准确,建立稳定旋转细胞系有助于筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究
        需要诱导表达系统主要是在需要一些致死基因或时空表达的情况下;
        需要用细胞进行动物实验的,如裸鼠肿瘤形成等,往往需要建立稳定旋转细胞系。
        影响稳转细胞株建立的主要因素是什么?
        整合位点转录活性:决定外源基因片段在稳定株中的表达质量;
        外源基因整合率:决定稳定株筛选的难易程度;
        插入外源基因片段的拷贝数:通常低拷贝或单拷贝可以减少人为干扰;
        外源基因片段整合到细胞后的稳定性:不同整合位点决定了染色体中外源片段的稳定性,部分区域容易发生重组和丢失,稳定株筛选后出现丢失现象。
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