稳转细胞株的选择、筛选和保存

　　稳转细胞株是指经过基因工程技术稳定表达特定外源蛋白的细胞株。这些细胞株不仅可以用于基础研究，还可以应用于药物研发和生物制药等领域。
　　稳转细胞株的选择、筛选和保存：
　　1.细胞株的选择
　　选择适合基因转染的细胞株非常重要。通常选择易于培养和转染，细胞生长快速和存活率高的细胞株。例如，HEK293,CHO和NIH3T3等细胞株被广泛应用于细胞株的制备中。
　　2.外源基因的构建和转染
　　外源基因是指要表达的外源蛋白编码的基因。为了实现外源基因的表达，需要将其转染进目标细胞中。转染方法包括化学法、电穿孔法、病毒载体法等多种方法。在进行基因转染时，应注意转染条件的选择和优化，例如转染试剂的浓度、转染时间、细胞密度等因素。
　　3.稳定细胞株的筛选
　　在基因转染后，需要筛选出稳定表达目标蛋白的细胞株。通常采用药物筛选法或流式细胞术筛选法。药物筛选法是通过将药物加入培养基来抑制非稳定细胞株的生长，最终筛选出稳定细胞株。流式细胞术筛选法则根据外源蛋白的表达水平，利用荧光染料等检测手段筛选出稳定细胞株。
　　4.稳定细胞株的保存和扩增
　　经过筛选后，需要对稳定细胞株进行保存和扩增。常用的方法是将细胞株冻存，以备之后的实验或生产使用。在存放过程中，应严格控制温度和保持液氮冷冻状态。在需要扩增细胞株时，应根据需要制定培养策略，如生长温度、培养基配方和培养时间等。
　　总之，稳转细胞株的制备需要多个步骤和技术的支持。细胞株的得到将极大地推进基础研究和生物制药的发展。