稳转株构建过程有关细胞瞬时转染的说明

 　　稳转株构建是利用哺乳动物系统生产蛋白，主要方式有瞬时转染和稳转株筛选两种。通过稳定细胞系构建筛选稳定表达细胞株。针对瞬时转染，外源基因在短时间转录翻译得到的蛋白量较少，1mg质粒得到1mg蛋白，能够满足小量蛋白制备，大量生产成本很高。稳定转染的是将外源基因整合到细胞自身的基因组上，随着细胞的生长分裂外源基因可以稳定表达，同时经过抗生素加压筛选，最终得到能够稳定表达蛋白的稳定细胞系。
　　瞬时转染以Lipofectamine转染试剂为例的操作流程，不同转染试剂请参考说明书：
　　1.将复苏后常规培养的细胞按照1-3x10^5接种到6孔板中，加入2-4ml的*培养基，混匀放置在二氧化碳培养箱中37℃过夜；
　　2.无菌状态下配置如下溶液
　　①用100ul的无血清培养基稀释2ug的待转染的质粒；
　　②用100ul的无血清培养基稀释25ul的Lipofectamine转染试剂（血清的存在会影响转染效率，因此要使用无血清培养基转染）。
　　3.将ab溶液混合并摇匀，室温下放置30min左右；
　　4.细胞培养至80%单层左右，用无血清培养基洗涤细胞2次，每孔加入1ml的无血清培养基，并将混合后的ab溶液逐滴加入到每孔，按十字方向轻摇混匀，二氧化碳培养箱中37℃培养24小时；
　　5.将转染液倒出，换为*培养基继续培养。