活性蛋白质

　　活性蛋白质是指一种复杂的有机化合物。构成蛋白质的基本单位是氨基酸，氨基酸经脱水缩合后再形成肽链。蛋白质是生物大分子，由一条或多条多肽链组成，每条多肽链有20到几百个氨基酸残基。各种氨基酸的残基又按一定的顺序排列。它一方面直接参与皮肤细胞基因表达与生理信号的传递，从而从源头上修复细胞，阻断衰老。另一方面能营养肌肤，提高肌肤自身的调节能力，立体式构建和维护肌肤生态环境，从而达到抗衰老和护肤的目的。

　　原来是从溶液离子的活动度和酶的活性开始，上至高级生命系统和生理机构的功能活动都适用的一种极其概括的非专门术语。活性是指具有生命力 能够顽强活跃下去的一种活动性质。

　　对赋予活性意义时，一般使用活性化或激活（activation）；在指去除活性时，则使用非活性化或失活（inactivation）等词。在刺激生理学中有关兴奋膜的反应性（reactivity），对不限于简单地被动去极化并伴有一定结构上的变换被看作是主动的（active）而不连续的反应，也用此词来称呼。

　　生长蛋白因子是一类通过与特异的、高亲和的细胞膜受体结合，调节细胞生长与其他细胞功能等多效应的多肽类物质。存在于血小板和各种成体与胚胎组织及大多数培养细胞中，对不同种类细胞具有一定的专一性。通常培养细胞的生长需要多种生长因子顺序的协调作用，肿瘤细胞具有不依赖生长因子的自主性生长的特点。在分泌特点上，生长因子主要属于自分泌（autocrine）和旁分泌（paracrine）。许多生长因子已被提纯和确定了其结构组成。如血小板来源的生长因子（PDGF）是个热稳定、具较高正电荷的蛋白质，由含有二硫键的二聚体组成，分子量30000道尔顿左右。又如表皮生长因子（EGF）是个热稳定、含有53个氨基酸残基的多肽，分子量为6000道尔顿左右。各类生长因子都有其相应的受体，是普遍存在于细胞膜上的跨膜蛋白，不少受体具有激酶活性，特别是酪氨酸激酶活性（如PDGF受体、 EGF受体等）。生长因子有多种，如血小板类生长因子（血小板来源生长因子，PDGF；骨肉瘤来源生长因子ODGF）、表皮生长因子类（表皮生长因子，EGF、转化生长因子，TGFα和TGFβ）、成纤维细胞生长因子（αFGF、βFGF）、类胰岛素生长因子（IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ）、神经生长因子（NGF）、白细胞介素类生长因子（IL-1、IL-1、IL-3等）、红细胞生长素（EPO）、集落刺激因子（CSF）等。

　　活性蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的*配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于蛋白质电泳、免疫共沉淀、酶活测定等下游蛋白研究。

　　使用方法:

　　细胞蛋白提取:

　　1.提取液制备:每50Oul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。

　　2.取5-10×106个细胞，在4℃，1000rpm条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

　　3.用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸千上清。4.每5×106个细胞中加入500ul冷的'蛋白提取液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。

　　5.在4℃，14000rpm条件下离心15分钟。

　　6.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到蛋白样品。

　　7.将上述蛋白提取物定量后分装于-80°℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。组织蛋白提取:

　　1.提取液制备:每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

　　2.取100mg组织样本剪碎，加入蛋白提取液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。

　　3.将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃，10000rpm条件下离心5分钟。

　　4.将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到活性蛋白样品。

　　5.将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。