一、载体构建的基本实验步骤
(1)目的DNA片段和载体的制备;
(2)目的DNA片段和载体的连接;
(3)连接产物的转化;
(4)克隆筛选。
(5)测序验证及结果交付
二、详细内容
1、以PCR扩增为基础的各类载体构建,如大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、杆状病毒表达载体、哺乳动物表达载体;报告基因载体等;
2、基因定点突变,包括单点突变,多点突变,基因缺失等;
3、载体元件替换和改造;
4、siRNA载体和miRNA表达载体构建;
5、过表达载体构建。
Tet-pLKO-Puro-PMP22-shRNA3基因沉默,诱导质粒 |
Tet-pLKO-Puro-PMP22-shRNA2基因沉默,诱导质粒 |
pAcGP67B蛋白表达质粒 |
Tet-pLKO-Puro-PMP22-shRNA1基因沉默,诱导质粒 |
pTrcHis2A蛋白表达质粒 |
pHY-P43蛋白表达质粒 |
pMA0911蛋白表达,分泌质粒 |
pBE2R蛋白表达,分泌质粒 |
pBE980a蛋白表达,分泌质粒 |