一、载体构建的基本实验步骤
(1)目的DNA片段和载体的制备;
(2)目的DNA片段和载体的连接;
(3)连接产物的转化;
(4)克隆筛选。
(5)测序验证及结果交付
二、详细内容
1、以PCR扩增为基础的各类载体构建,如大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、杆状病毒表达载体、哺乳动物表达载体;报告基因载体等;
2、基因定点突变,包括单点突变,多点突变,基因缺失等;
3、载体元件替换和改造;
4、siRNA载体和miRNA表达载体构建;
5、过表达载体构建。
pLKO.1-BCL2L11shRNA1-EGFP-Puro基因沉默质粒 |
pLVX-FLAG-Puro蛋白表达质粒 |
pLB2 CAG P2Gm基因沉默质粒 |
pCDH-CMV-MCS-EF1-Hygro蛋白表达质粒 |
pLKO.1-EGFP-Puro基因沉默质粒 |
pLVX-TetOne-Puro蛋白表达,诱导质粒 |
pLVML-3×FLAG-MCS-Puro蛋白表达质粒 |
pCDH-CMV-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro蛋白表达质粒 |
pDC316-ZsGreen1-shRNA基因沉默质粒 |
041 pLVPTH2-tTR-KRAB-Cerulean基因沉默质粒 |