注意事项:转化前请准确查找该质粒相应的抗生素名称、抗生素使用浓度、感受态名称和培养温度。
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl~50μl无菌水或 pH8.0 的 1*TE缓冲液来溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒
pMSCVPuro-IRES-EGFP蛋白表达质粒 |
pAAV-MCS蛋白表达质粒 |
pSUPER-Retro-Puro-shNup133-2基因沉默质粒 |
pSUPER-Retro-Puro-shNup93-SpeI基因沉默质粒 |
pLKO.1-PMP22shRNA3基因沉默质粒 |
pLKO.1-PMP22shRNA1基因沉默质粒 |
pLKO.1-PMP22shRNA2基因沉默质粒 |
pLKO.1-PMP22shRNA4基因沉默质粒 |
pCS2-EGFP-MCS-3×FLAG蛋白表达质粒 |
pFUGW-H1基因沉默质粒 |
pBV220-Cam蛋白表达质粒 |
pTrc99a-Kan蛋白表达质粒 |