一、载体构建的基本实验步骤
(1)目的DNA片段和载体的制备；
(2)目的DNA片段和载体的连接；
(3)连接产物的转化；
(4)克隆筛选。
(5)测序验证及结果交付
二、详细内容
1、以PCR扩增为基础的各类载体构建，如大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、杆状病毒表达载体、哺乳动物表达载体；报告基因载体等；
2、基因定点突变，包括单点突变，多点突变，基因缺失等；
3、载体元件替换和改造；
4、siRNA载体和miRNA表达载体构建；
5、过表达载体构建。
| Tet-pLKO-Puro-NAP1L3(human)-shRNA1基因沉默,诱导质粒 |
| pLentiCRISPRV2-EZH2(human)-sgRNA2基因编辑质粒 |
| Tet-pLKO-Puro-NAP1L3(human)-shRNA3基因沉默,诱导质粒 |
| pLentiCRISPRV2-EZH2(human)-sgRNA1基因编辑质粒 |
| pK18mob基因编辑质粒 |
| pSTV28基因克隆质粒 |
| pCDH-CAG-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro蛋白表达质粒 |
| pLVX-CMV500蛋白表达质粒 |
| pEU-E01-MCS蛋白表达质粒 |
| pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-SLC16A1(human)-shRNA1基因沉默质粒 |
王晓
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