一、载体构建的基本实验步骤
(1)目的DNA片段和载体的制备；
(2)目的DNA片段和载体的连接；
(3)连接产物的转化；
(4)克隆筛选。
(5)测序验证及结果交付
二、详细内容
1、以PCR扩增为基础的各类载体构建，如大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、杆状病毒表达载体、哺乳动物表达载体；报告基因载体等；
2、基因定点突变，包括单点突变，多点突变，基因缺失等；
3、载体元件替换和改造；
4、siRNA载体和miRNA表达载体构建；
5、过表达载体构建。
| pLKO.1-EGFP-Puro-RNF216-shRNA1基因沉默质粒 |
| pET28a-K-Ras蛋白表达质粒 |
| pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-CD19-shRNA2(human)基因沉默质粒 |
| pACYC177-T7蛋白表达质粒 |
| pCold-SUMO-NP(virus)蛋白表达质粒 |
| pCold-SUMO-NA(virus)蛋白表达质粒 |
| psh-EGFP-puro-ZEB1(human)基因沉默质粒 |
| pLKO.1-Puro-MAPK3-shRNA4(human)基因沉默质粒 |
| pMSCVpuro-6xHis-Ass1(mouse)蛋白表达质粒 |
王晓
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