一、载体构建的基本实验步骤
(1)目的DNA片段和载体的制备;
(2)目的DNA片段和载体的连接;
(3)连接产物的转化;
(4)克隆筛选。
(5)测序验证及结果交付
二、详细内容
1、以PCR扩增为基础的各类载体构建,如大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、杆状病毒表达载体、哺乳动物表达载体;报告基因载体等;
2、基因定点突变,包括单点突变,多点突变,基因缺失等;
3、载体元件替换和改造;
4、siRNA载体和miRNA表达载体构建;
5、过表达载体构建。
pLKO.1-EGFP-Puro-RNF216-shRNA1基因沉默质粒 |
pET28a-K-Ras蛋白表达质粒 |
pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-CD19-shRNA2(human)基因沉默质粒 |
pACYC177-T7蛋白表达质粒 |
pCold-SUMO-NP(virus)蛋白表达质粒 |
pCold-SUMO-NA(virus)蛋白表达质粒 |
psh-EGFP-puro-ZEB1(human)基因沉默质粒 |
pLKO.1-Puro-MAPK3-shRNA4(human)基因沉默质粒 |
pMSCVpuro-6xHis-Ass1(mouse)蛋白表达质粒 |