注意事项:转化前请准确查找该质粒相应的抗生素名称、抗生素使用浓度、感受态名称和培养温度。
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl~50μl无菌水或 pH8.0 的 1*TE缓冲液来溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒
pGEM-HE蛋白表达质粒 |
pDC316-ZsGreen1-CD274-shRNA1基因沉默质粒 |
pDrive基因模板质粒 |
pET23b-Tac-NDH2蛋白表达质粒 |
pTOPO-Zdhhc24-r基因模板质粒 |
pLKO.1-eIF3a-shRNA1基因沉默质粒 |
pLKO.1-FTO-shRNA1基因沉默质粒 |
pLKO.1-EIF4E-shRNA1基因沉默质粒 |
pLKO.1-METTL14-shRNA1基因沉默质粒 |
pLKO.1-EGFP-Puro-K2A-shRNA1基因沉默质粒 |