一、载体构建的基本实验步骤
(1)目的DNA片段和载体的制备;
(2)目的DNA片段和载体的连接;
(3)连接产物的转化;
(4)克隆筛选。
(5)测序验证及结果交付
二、详细内容
1、以PCR扩增为基础的各类载体构建,如大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、杆状病毒表达载体、哺乳动物表达载体;报告基因载体等;
2、基因定点突变,包括单点突变,多点突变,基因缺失等;
3、载体元件替换和改造;
4、siRNA载体和miRNA表达载体构建;
5、过表达载体构建。
pENTR-His基因模板质粒 |
pSV40-Map4-m基因模板质粒 |
pDC316-mCMV-EGFP-Linker-MTAP(human)(2同义突变)蛋白表达质粒 |
pCDH-EF1a-3×FLAG-MCS-T2A-Puro蛋白表达质粒 |
pLVshRNA-U6-METTL14(mouse)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默质粒 |
pLVshRNA-U6-IQGAP1(human)-shRNA1-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默质粒 |
pLVshRNA-U6-RAB11FIP2(mouse)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默质粒 |
pLVshRNA-U6-ARID3A(human)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默质粒 |
pLVX-CMV-PD-1(mouse)-PGK-Puro蛋白表达质粒 |