一、载体构建的基本实验步骤
(1)目的DNA片段和载体的制备；
(2)目的DNA片段和载体的连接；
(3)连接产物的转化；
(4)克隆筛选。
(5)测序验证及结果交付
二、详细内容
1、以PCR扩增为基础的各类载体构建，如大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、杆状病毒表达载体、哺乳动物表达载体；报告基因载体等；
2、基因定点突变，包括单点突变，多点突变，基因缺失等；
3、载体元件替换和改造；
4、siRNA载体和miRNA表达载体构建；
5、过表达载体构建。
| pENTR-His基因模板质粒 |
| pSV40-Map4-m基因模板质粒 |
| pDC316-mCMV-EGFP-Linker-MTAP(human)(2同义突变)蛋白表达质粒 |
| pCDH-EF1a-3×FLAG-MCS-T2A-Puro蛋白表达质粒 |
| pLVshRNA-U6-METTL14(mouse)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默质粒 |
| pLVshRNA-U6-IQGAP1(human)-shRNA1-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默质粒 |
| pLVshRNA-U6-RAB11FIP2(mouse)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默质粒 |
| pLVshRNA-U6-ARID3A(human)-shRNA3-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默质粒 |
| pLVX-CMV-PD-1(mouse)-PGK-Puro蛋白表达质粒 |
王晓
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