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pET28a-NDH2-YH(密码优化)蛋白表达质粒

pET28a-NDH2-YH(密码优化)蛋白表达质粒

简要描述:
pET28a-NDH2-YH(密码优化)蛋白表达质粒
启动子T7
复制子pBR322
原核抗性Kan
克隆菌株DH5α
培养条件37℃
质粒宿主大肠杆菌
质粒用途蛋白表达
片段类型基因CDS
片段物种人
原核抗性卡那霉素

更新时间:2021-06-21

访问量:33

厂商性质:生产厂家

生产地址:上海

注意事项:转化前请准确查找该质粒相应的抗生素名称、抗生素使用浓度、感受态名称和培养温度。
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl~50μl无菌水或 pH8.0  1*TE缓冲液来溶解质粒,室温放置1min

2、从-80冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;

3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min

442热激90s,再冰浴2min

5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min

66000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;

7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;

8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h

9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒

 

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