微生物菌种的保藏技术：延长菌种活性的实用技巧

 

　　一、低温冷冻保藏：常用的“休眠术”

 

　　低温可显著降低微生物代谢速率，是保藏的核心思路。其中，-80℃超低温冰箱或液氮（-196℃）冷冻是经典的方法。操作时需注意两点：一是添加保护剂（如10%-20%甘油、5%二甲基亚砜），避免冰晶刺破细胞；二是控制降温速率（约1℃/分钟），减少细胞内冰晶形成。例如，大肠杆菌、酵母菌等常规菌株经甘油管冷冻后，可稳定保存3-5年；环境微生物（如嗜热菌）则需更低温度（液氮）以抑制其残留代谢。

 

　　二、冻干保藏：“脱水+真空”的双重保险

 

　　冷冻干燥（冻干）通过“预冻-升华脱水-密封”三步，将菌种制成干燥的粉末状安瓿。其优势在于去除水分（微生物代谢需水参与），同时真空环境隔绝氧气与杂菌污染。实际操作中，常用脱脂牛奶或血清作为保护基质（提供营养并缓冲渗透压），预冻温度需低于-40℃，确保菌体冻结。冻干菌种可在4℃避光保存5-10年，尤其适合放线菌、霉菌等难保藏菌株，但需注意复溶时需无菌操作，避免二次污染。

 

　　三、定期传代与斜面保藏：基础但需谨慎

 

　　对于短期使用（数周至数月）的菌种，斜面或半固体穿刺保藏是便捷选择。将菌种接种于含营养琼脂的斜面，25-37℃培养后，4℃冷藏可延缓代谢。但此方法依赖频繁传代（每1-3个月转接一次），易因传代次数过多导致变异（如质粒丢失、性状退化）。因此，仅推荐作为临时保藏手段，长期保存需结合其他方法。

 

　　四、特殊菌种的针对性策略

 

　　厌氧菌需严格无氧环境，可采用庖肉培养基（含肉渣耗氧）或充氮密封保藏；病毒或噬菌体则需宿主细胞共保藏（如大肠杆菌与λ噬菌体共冻存）；古菌因细胞壁结构特殊，常需添加复合保护剂（如海藻糖+甘油）增强抗逆性。