天然蛋白作为生命活动的关键分子，其纯度与活性直接影响研究及应用的可靠性。在生物医药、酶工程等领域，建立科学的检测体系是确保蛋白质量的核心环节。
一、纯度检测：多维度解析杂质分布
蛋白纯度的评估需结合多种技术，以全面反映样品均一性。
1.SDS-PAGE凝胶电泳：基于分子量差异分离蛋白，通过染色（如考马斯亮蓝）观察条带单一性，可初步判断纯度，但对微量杂质灵敏度有限。
2.高效液相色谱（HPLC）：反相或尺寸排阻色谱可定量检测杂蛋白或聚合体，分辨率达微克级，适用于高纯度样品分析。
3.质谱联用技术：如LC-MS/MS能鉴定微量杂质蛋白或非目标修饰产物，从分子层面揭示纯度问题。
4.紫外光谱与等电聚焦：前者通过A280/A260比值评估核酸污染，后者依据等电点分离电荷异构体，补充纯度信息。
二、活性检测：功能导向的精准评估
活性是蛋白生物功能的直接体现，需根据蛋白类型设计特异性实验。
1.酶活性测定：以底物转化率或产物生成速率为指标，如辣根过氧化物酶（HRP）可通过TMB显色反应测OD值；需设置空白对照排除非特异性干扰。
2.受体/配体结合实验：利用表面等离子体共振（SPR）或ELISA检测结合亲和力（KD值），反映蛋白与靶标相互作用能力。
3.细胞功能验证：对信号蛋白或生长因子，可通过报告基因表达或细胞增殖实验评估其生物学效应。
4.圆二色光谱（CD）：分析二级结构完整性，间接反映活性构象是否保留。
三、方法选择与注意事项
纯度与活性检测需协同进行：高纯度未必保证高活性（如折叠错误），而活性异常可能提示纯度不足或变性。实际应用中，应优先采用正交方法交叉验证，并结合蛋白特性优化条件（如缓冲液pH、温度）。此外，标准品校准与重复性实验是确保数据可靠性的关键。
更新时间：2026-02-09 
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