一、载体构建的基本实验步骤
(1)目的DNA片段和载体的制备；
(2)目的DNA片段和载体的连接；
(3)连接产物的转化；
(4)克隆筛选。
(5)测序验证及结果交付
二、详细内容
1、以PCR扩增为基础的各类载体构建，如大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、杆状病毒表达载体、哺乳动物表达载体；报告基因载体等；
2、基因定点突变，包括单点突变，多点突变，基因缺失等；
3、载体元件替换和改造；
4、siRNA载体和miRNA表达载体构建；
5、过表达载体构建。
| pLVX-6×NFAT-IL20-CCL20-EF1a-CDR19(mouse)-EGFR-WPRE蛋白表达质粒 |
| pHIV-EF1a-MCS-IRES-EGFP蛋白表达质粒 |
| pLKO.1-mCherry-P2A-Neo基因沉默质粒 |
| pUCP18基因克隆质粒 |
| pAAV-CMV-MCS-PGK-EGFP-E2A-Puro蛋白表达质粒 |
| pMIGR1-FLAG-BCR-ABL-P210-T1216I蛋白表达质粒 |
| pLKO.1-U6-USP37(human)-shRNA3-hPGK-Puro基因沉默质粒 |
| pLKO.1-U6-BARD1(human)-shRNA1-PGK-Puro基因沉默质粒 |
| pLKO.1-U6-USP37(human)-shRNA1-hPGK-Puro基因沉默质粒 |
王晓
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